Синтез длинных пептидов (до 189 аминокислот)

Синтез длинных пептидов|Индивидуализация длинноцепочечных пептидов|Синтез сложных пептидов|Пептиды более 50членов|Наука-Пептид

Нужен длинный пептид, содержащий более 50 аминокислот? Наука-Услуга Peptide по синтезу длинных пептидов охватывает 50–189 аминокислот, используя стратегию сегментированного синтеза, позволяющую преодолевать проблемы гидрофобной агрегации и низкой эффективности синтеза и т. д.. 20 Многолетний опыт и стабильная доставка. Добро пожаловать, свяжитесь с нами.

Почему длинные пептиды трудно получить?
Любой, кто занимался синтезом пептидов, знает, что проблема возникает, когда пептидная цепь длинная: в пределах 20 аминокислот большинство компаний могут это сделать. Когда дело доходит до более чем 40 аминокислот, мы начинаем подбирать последовательность. При наличии 60 аминокислот и более количество компаний, которые могут взять на себя управление, сокращается вдвое. Когда дело доходит до более чем 100 аминокислот, немногие компании осмеливаются это сделать.

 

Почему? Потому что синтез длинных пептидов сталкивается с несколькими подводными камнями:

Эффективность синтеза снижается: при каждом расширении аминокислоты выход будет дисконтироваться один раз. 30 аминокислотного пептида, каждый шаг с выходом 99%, конечный выход по-прежнему составляет 74%; 60 аминокислот, каждый шаг по-прежнему 99%, конечный выход всего 55%. На самом деле выход многих ступеней не может достигать 99%.
Гидрофобная агрегация. Когда в длинном пептиде много гидрофобных аминокислот, пептидная цепь начинает «слипаться» на смоле, и аминокислоты, находящиеся за ней, не могут проникнуть в нее.

Сложность очистки: время удерживания длинных пептидов и примесей слишком близко друг к другу для чистого разреза.
Плохая растворимость: когда пептид получен, его нельзя растворить, поэтому эксперимент нельзя проводить.
Мы уже бывали в таких выбоинах и знаем, как их обойти.

1. Длина: 50-189 аминокислот.

2. Стратегия сегментированного синтеза
Самый эффективный способ борьбы с длинными пептидами — сегментировать их:
Выбор сегмента: разрежьте длинный пептид на 2–4 сегмента по 30–60 аминокислот каждый. Точка разреза должна быть расположена в положении, где сложность синтеза невелика, например, избегая непрерывной гидрофобной области.
Синтез фрагментов: каждый фрагмент синтезируется и очищается индивидуально до достаточно высокой чистоты.
Сращивание фрагментов: соединение фрагментов в растворе или на смоле. Способ соединения может быть как природным химическим, так и ферментативным.
Складывание: если пептид имеет дисульфидную связь, после сплайсинга он должен быть сложен в правильную конформацию.

3. Чистота: в зависимости от экспериментальных требований.

Каждый длинный пептид сопровождается отчетом ВЭЖХ и МС, что делает данные о чистоте прозрачными.

4. Модификации: длинные пептиды также могут добавлять функции.
Флуоресцентная маркировка: FITC, TAMRA, хотят увидеть, куда проходит длинный пептид.
Биотин: выполните-опускание или проверьте.
Мечение изотопов: для количественного определения ЯМР или масс-спектрометрии.
Фосфорилирование/гликозилирование: имитация пост-трансляционных модификаций.

1. Мы занимаемся этим уже 20 лет
Синтез длинных пептидов – это не то, что может сделать каждый. За прошедшие годы мы имели дело со многими длинными пептидами: фрагментами трансмембранных белков, слитыми вирусными пептидами, амилоидными белками, антимикробными пептидами и т. д. У нас есть хорошее представление о том, какие последовательности легко агрегируются и какие условия могут их сохранить. Если вы придете к нам на синтез длинных пептидов, вам, по крайней мере, не придется с самого начала наступать на яму.

2. Фракционный синтез: не просто резать на части
Сегментация звучит просто, но важно, где разрезать, какой длины каждый сегмент и как их соединить. У нас есть несколько принципов:
Разрезайте гидрофильную зону: избегайте разрезания гидрофобной сердцевины, иначе сегменты соберутся сами по себе.
Сбалансируйте длину фрагментов: не делайте один сегмент особенно трудным, а другие — особенно простыми.. 3.
Выбор точки соединения. Природные химические соединения требуют наличия тиоэфира на C-конце и Cys на N-конце, который необходимо спроектировать заранее.

3. Гидрофобные пептиды: специальная система растворителей.
Некоторые длинные пептиды настолько гидрофобны, что их нельзя растворить обычными растворителями, поэтому при синтезе они слипаются на смоле. У нас есть специальная система растворителей и добавки, которые поддерживают растяжение пептидной цепи во время процесса синтеза, чтобы могли проникнуть следующие аминокислоты.

4. Контроль качества: данные на каждом этапе
Контроль качества длинных пептидов более сложен, чем у коротких:
Контроль качества полупродуктов: после синтеза каждого фрагмента сначала измеряют чистоту и молекулярную массу, а затем после прохождения теста переходят к следующему этапу.
Мониторинг процесса сварки: попробуйте реакцию соединения и измерьте MS, чтобы увидеть эффективность соединения.
Проверка конечного продукта: ВЭЖХ на чистоту, МС на молекулярную массу, МС/МС на правильность последовательности (опционально).
Тест на растворимость: предоставьте рекомендуемые растворители и методы растворения, чтобы не получить нерастворимые пептиды.
При синтезе длинных пептидов данные говорят сами за себя, и каждый шаг отслеживается.

5. От миллиграммов до ста миллиграммов, вплоть до конца
Миллиграммы на этапе скрининга, десять миллиграммов на этапе проверки, сто миллиграммов на структурном исследовании - мы можем взять все это. Тот же проект, тот же аналог, нет необходимости в повторной-гармонизации.

• Доставка: Лиофилизированный порошок, в центрифужных пробирках или флаконах, защищенных азотом.
• Сопроводительные документы: сертификат подлинности (профиль ВЭЖХ + профиль МС), МС/МС (подтверждение последовательности необязательно), отчет о синтезе (процесс сегментации и сплайсинга).
• Дополнительные тесты: содержание пептидов, эндотоксинов, влажность, аминокислотный состав, тест на растворимость.
• Индивидуальная упаковка: порционирование и маркировка в соответствии с вашими требованиями.
• Перед отправкой каждый продукт Long Peptide Synthesis -проверяется дважды, чтобы убедиться в правильности последовательности и соответствии стандарту чистоты.

Если вам нужен трансмембранный пептид из 80 аминокислот или вирусный белок из 150 аминокислот, вы можете обратиться к нам. Если вы попросите Science-Peptide провести синтез длинных пептидов, по крайней мере, вам не придется пробовать один за другим.

Мне нужно, чтобы ты сказал мне:
Пептидная последовательность (или целевая информация)
Сколько (миллиграммы)
требования к чистоте
не имеют дисульфидных связей или других модификаций

Когда ты этого хочешь?

Дайте вам технико-экономическое обоснование и предложение в течение 24 часов.