При использовании пептидов мы часто сталкиваемся с показателями чистоты пептидов и содержания пептидов. Многие люди могут задаться вопросом, почему чистота их пептидов составляет 95%, а содержание пептидов составляет всего 80%. Потому что это два совершенно разных понятия.
Чистота пептида: Чистота пептида относится к количеству целевого пептида, обнаруженного при длине волны 214 нм (214 нм — длина волны поглощения пептидной цепи) с помощью анализа ВЭЖХ.
Содержание пептидов: это относится к процентному содержанию пептидов по отношению к не-веществам в образце.
Чистота пептида относится к содержанию целевого пептида, определяемого с помощью ВЭЖХ при 214 нм (214 нм — длина волны поглощения пептидной цепи). Помимо целевого пептида, ВЭЖХ может обнаруживать примеси, в том числе: удаленные последовательности (в целевых последовательностях отсутствует один или несколько аминокислотных остатков), усеченные последовательности (последовательности, образующиеся во время защиты) и последовательности с неполностью снятой защитой (что приводит к процессу синтеза или окончательному процессу расщепления). Однако ВЭЖХ не может обнаружить воду и остаточные соли, такие как трифторацетат (ТФУ) и ацетат. Во время синтеза пептидов пептидная последовательность отщепляется от смолы с помощью TFA, а во время очистки также образуется небольшое количество TFA. Следовательно, свободный аминоконец и другие боковые цепи пептида, такие как Arg, Lys и His, могут генерировать небольшие количества примесей TFA. Еще одна проблема – влажность. Пептиды обычно обезвоживают с помощью лиофилизации, но даже в этом случае вода будет существовать в разной степени в зависимости от способности ковалентного связывания. Таким образом, доставленные пептиды обычно содержат соли TFA и следовые количества воды, которые не обнаруживаются с помощью ВЭЖХ, что приводит к различиям в содержании и чистоте пептидов.
