Семаглутидные примеси

Семаглутидные примеси|Контроль примесей симеглутида|Пользовательский синтез примесей и подтверждение структуры|Наука-Пептид

Контроль примесей сома-лютида (симеглутида) - для исследования качества препарата GLP-1, подачи заявки на непатентованный препарат. Science-Пептид обеспечивает индивидуальный синтез примесей, связанных с сома-лютидом, включая недостающие пептиды, окисленные примеси, продукты отшелушивания жирных кислот, примеси, связанные с цепью ПЭГ, и т. д., сопровождаемые данными структурного подтверждения. Мы можем поддержать ваше исследование профиля примесей. Добро пожаловать, свяжитесь с нами.

Семаглутид (также известный как семаглутид) в последние годы пользуется большой популярностью. Ново Нордиск полагается на него, чтобы подтолкнуть рыночную стоимость второго в мире отечественного производителя пептидных генериков, почти никто на него не засматривается. Лекарственные формы для перорального применения и лекарственные формы для инъекций представляют собой крупные рынки. После истечения срока действия патента, кто первым сможет провести качественные исследования, у кого будет возможность получить первый дженерик.

 

Однако качественное исследование соматостатина, прямо скажем, сложнее, чем многих пептидов. Это 31-пептид с цепью жирной кислоты (октадекандиовой кислоты) и линкером ПЭГ. Эта структура определяет его спектр примесей особенно богатый - недостающими пептидами, окисленными примесями, продуктами отщепления жирных кислот, примесями, связанными с цепью ПЭГ, каждый димер должен иметь контроль, каждый должен быть прозрачным. Особенно у сомалутида уникальна цепь ПЭГ, которой нет в обычных пептидах.

 

Нами накоплен большой опыт синтеза сложных пептидных примесей. Мы специализируемся на изучении соматостатина и знаем, каковы трудности с его профилем примесей и каковы основные элементы контроля. Мы можем настроить синтез различных средств контроля примесей семаглутида в соответствии с вашими потребностями, с данными структурного подтверждения, и помочь вам разработать метод, чтобы вам было меньше шансов получить добавку при подаче заявки.

Молекулярная структура соматостатина определяет, что его профиль примесей намного сложнее, чем у обычных пептидов. Когда мы проводим исследования примесей, мы в основном сосредотачиваемся на следующих категориях:

Отсутствует пептид
31 аминокислота, любая из которых пропущена в процессе синтеза, является примесью. Времена удерживания недостающих пептидов при ВЭЖХ были широко распределены, с различной полярностью недостающих пептидов в разных положениях. Некоторые отсутствуют на N-конце, некоторые посередине и некоторые рядом с местом прикрепления жирных кислот. Мы получили заказ от клиента, который попросил около дюжины недостающих пептидов в разных положениях, чтобы найти все возможные недостающие примеси в их процессе.

Окисляющие примеси
Сомалутид содержит в своей последовательности метионин (Met), который подвержен окислению до сульфоксида, а затем до сульфона. Окисленные примеси часто появляются при исследованиях стабильности и со временем растут. Мы проводили сравнение, в ускоренных условиях за месяц пик окисления может вырасти до более чем 0,3%, без контроля.

Продукты, выделяющие жирные кислоты
Боковая цепь жирной кислоты (октадекандиовая кислота) соматостатина присоединена к лизину через линкер, и эта модификация может частично теряться во время синтеза или хранения. Более проблематично то, что выделение может происходить в разных местах - между жирной кислотой и линкером, а также между линкером и пептидом -, что приводит к образованию различных примесей. Для наших клиентов мы синтезировали несколько примесей, связанных с жирными кислотами-, начиная от полного выделения и заканчивая небольшими его частями.

Примеси, связанные с цепью ПЭГ-
Это наиболее специфический тип примеси в соматостатине. Он имеет линкер ПЭГ (полиэтиленгликоль), и цепь ПЭГ может разрываться, укорачиваться или полимеризоваться во время синтеза, что приводит к образованию ряда сопутствующих примесей. Эти примеси не встречаются в обычных пептидах, но уникальны для соматостатина, и их трудно изучать в исследованиях качества. Мы разработали различные варианты удаления цепи ПЭГ, укорочения цепи ПЭГ и окисления цепи ПЭГ.

Димеры/полимеры
Две или более молекулы соматостатина группируются вместе, образуя димер или более. Молекулярная масса димера в два раза больше, чем у основного пика, и при ВЭЖХ он часто представляет собой широкий пик, поэтому его необходимо специально отделить и очистить, прежде чем его можно будет использовать в качестве контроля. Мы подготовили димеры, и потребовалось несколько циклов очистки, чтобы достичь чистоты более 95%.

Дезаминированные примеси
Аспарагин (Asn) и глутамин (Gln) легко деамидируются в кислых условиях или при нагревании, образуя изомеры. В последовательности соматостатина присутствует несколько Asn и Gln, а примесь дезамидирования часто появляется в тесте на принудительное разложение, поэтому для обнаружения примеси необходимо использовать контрольный продукт.

Диастереоизомеры
Во время синтеза длинной цепи отдельные аминокислоты могут подвергаться рацемизации с образованием диастереоизомеров. Содержание такого рода примесей обычно невелико, но при декларировании эксперты спросят, и для подтверждения лучше иметь контрольный продукт.

Многие из этих примесей невозможно приобрести, и их необходимо синтезировать по индивидуальному заказу. Мы уже выполнили множество проектов по персонализации примесей соматостатина, охватывающих все вышеперечисленные категории.

Удаление пептидного ряда
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, с подтверждением МС и ЯМР. Мы синтезировали набор пептидов с интервалом в 5 аминокислот от N-конца до C-конца.

Окисляющие примеси
Met in Somatostatin is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. The purity of the product is >95 %, и мы можем предоставить спектр ЖХ-МС для подтверждения степени окисления. Сульфоксид и сульфон разделяются с помощью ВЭЖХ, и мы можем сделать и то, и другое.

Продукты, выделяющие жирные кислоты
Это основной фокус примесей сомалутида. Цепь жирных кислот может быть полностью или частично смещена. Мы можем синтезировать серию вариантов для разных положений линьки. В одном из самых сложных проектов, которые мы когда-либо реализовывали, заказчик попросил нас синтезировать примесь с отсутствующими в цепочке жирных кислот 6 атомами углерода, и нам потребовалось два месяца, чтобы сделать это правильно.

Примеси, связанные с цепью ПЭГ-
Это одна из самых сложных примесей соматостатина, и это тоже наша сила. Цепь ПЭГ может отсутствовать, быть укороченной, разорванной, окисленной, и могут образовываться различные варианты. Мы сделали примесь с полным отсутствием цепи ПЭГ (т.е. де-ПЭГилированный соматостатин), вариант с уменьшенной вдвое длиной цепи ПЭГ и продукт с окисленной цепью ПЭГ. Заказчику были предоставлены эти средства контроля, и спектр примесей, связанных с ПЭГ-, был полностью установлен.

Димер
Димеры, образованные в результате перекрестных-сшивок или не-ковалентных взаимодействий, могут быть получены различными методами, выделены и очищены для обеспечения контроля высокой чистоты. Димеры сложно очищать, но у нас есть опыт, позволяющий разделить мономеры.

Дезаминированные примеси
Для сайтов Asn и Gln в последовательности мы можем подготовить дезамидированные контрольные примеси путем принудительной деградации или целевого синтеза. Разница в молекулярной массе после дезамидирования составляет всего 1, что нелегко отличить с помощью МС, поэтому для подтверждения мы обычно используем ЯМР или специальные хроматографические условия.

Dther индивидуальные примеси
Если в ходе ваших исследований вы обнаружите новую неизвестную примесь, мы можем помочь вам проанализировать структуру и синтезировать ее. Отправьте нам образец, мы проведем анализ ЖХ-МС, выясним структуру, затем направленный синтез, а затем сравним время удерживания и масс-спектр, чтобы подтвердить согласие. Мы проделывали этот процесс много раз, и процент успеха довольно высок.

Разработка и валидация аналитического метода
При настройке метода ВЭЖХ или ЖХ-МС необходим контроль примесей для локализации, определения разделения, проверки линейного диапазона и извлечения. Без контроля в проверке метода отсутствует часть. Многие клиенты просят нас сначала внести несколько ключевых примесей, чтобы настроить метод, а затем постепенно доработать все остальное.

Гетерогенная масс-спектрометрия
При декларировании дженерика требуется комплексный качественный и количественный анализ технологических примесей и продуктов деградации. Местоположение, содержание и структура каждой примеси должны быть подтверждены контрольным продуктом. Мы видели, что декларация информации была отправлена ​​для составления, в девяти случаях из десяти примеси этой части не понимались.

Исследования стабильности
В ходе долгосрочного-тестирования стабильности и ускоренного тестирования необходимо определить, какие продукты деградации являются доминирующими и каковы тенденции в контенте. Благодаря контролю примесей можно точно определить количество и контролировать их. Клиент проверял стабильность препарата соматостатина и обнаружил, что пик разложения быстро растет в ускоренных условиях, поэтому мы проанализировали его с помощью МС и синтезировали, чтобы подтвердить структуру, а затем клиент с облегчением сообщил об этом.

Тестирование пакетного выпуска
После коммерциализации каждая партия АФИ или состава должна быть проверена на наличие рассматриваемого вещества. Контроль примесей является важным инструментом для тестирования выпуска.

Информация о декларациях на непатентованные лекарственные средства
Исследования примесей являются ключевым разделом регистрационной информации. Предоставление полного профиля примесей и данных контроля значительно снижает риск публикации обзора.

Пример 1: Фармацевтическая компания, программа создания дженериков Сомалутида.
Они разрабатывают непатентованную версию соматостатина, и для валидации метода им необходим полный набор средств контроля примесей. Мы настроили для них 15 примесей: 6 недостающих пептидов, 2 окисленные примеси, 1 димер, 2 продукта отшелушивания жирных кислот, 3 примеси, связанные с цепью ПЭГ, и 1 примесь дезамидирования. Чистота каждого из них превышала 95% по данным МС и ЯМР. Менеджер проекта сказал: «Примеси сомалутида сложнее, чем у других пептидов, особенно у ПЭГ, который мы искали в ряде компаний, но все они сказали, что не могут этого сделать. Но вы смогли все это сделать, и данные были полными, что очень помогло». Впоследствии валидация их метода была успешно завершена, и сейчас они готовятся к подаче заявки.

Случай 2: CRO, специальное исследование примесей в цепи ПЭГ.
Они предприняли качественный исследовательский проект по соматостатину, который потребовал всестороннего анализа примесей, связанных с цепью ПЭГ. Мы систематически синтезировали примеси, связанные с ПЭГ-: полное отсутствие цепи ПЭГ, уменьшение вдвое длины цепи ПЭГ, окисление концов цепи ПЭГ и разрыв цепи ПЭГ на две части. синтезировали в общей сложности 8 примесей, связанных с ПЭГ-. Клиент использовал эти средства контроля для создания полного набора методов обнаружения примесей ПЭГ, что стало основным моментом в его регистрационной информации.

Случай 3: Исследования стабильности, биотехнологическая компания
Они проводили исследование стабильности состава соматостатина и обнаружили, что содержание продукта разложения быстро увеличивается в ускоренных условиях, но они не знали, что это такое. Мы проанализировали образец методом ЖХ-МС, предположили, что это была примесь жирных кислот, выделяющая в определенном месте, а затем целенаправленно синтезировали ее и подтвердили это путем сравнения. Они провели анализ с использованием этого контроля и точно отслеживали тенденцию этого продукта разложения. Позже, при подаче отчета, эта часть данных была подчеркнута экспертами, а из-за достоверности данных компенсация не была выдана.

Соматостатин — суперпопулярный продукт, но исследование примесей — деликатная работа, особенно примесей, связанных с цепочкой ПЭГ, и продуктов отшелушивания жирных кислот, с которыми многие производители не могут справиться. Если вы проводите качественные исследования или разрабатываете непатентованный соматостатин и нуждаетесь в контроле за примесями, обращайтесь к нам. Мы проделали большую работу, знаем, какие есть трудности, и знаем, как их преодолеть.