Примеси тирзепатида

Тирзепатид Примеси|Контроль примесей тилпептидов|Пользовательский синтез примесей и подтверждение структуры|Наука-Пептид

Контроль примесей тирзепатида - для GLP-1/GIP, двойное-исследование качества лекарств, отчетность по непатентованным лекарственным средствам. Science-Peptide обеспечивает индивидуальный синтез примесей, связанных с тилпептидом, включая делеционные пептиды, окисленные примеси, продукты отшелушивания жирных кислот, димеры и т. д., с данными структурного подтверждения в поддержку вашего исследования. Мы можем поддержать ваше исследование по спектроскопии примесей данными структурного подтверждения. Добро пожаловать, свяжитесь с нами.

Тирзепатид (Tirzepatide) — это двойной агонист GLP-1/GIP, который разработала компания Eli Lilly, и в последние два года его разработка идет полным ходом. Он обладает хорошим эффектом снижения сахара и сильным эффектом снижения веса, и его называют модернизированной версией «чудо-препарата для похудения». Отечественные производители пептидных дженериков многие на это засматриваются – после истечения срока действия патента, кто первым сможет пробежаться по качеству исследований, у кого будет возможность отхватить первый дженерик.

 

Однако качество тильпептида изучить не так-то просто. Он более сложен, чем симетикон, с 39 аминокислотами, боковой цепью жирной кислоты (эйкозандиовой кислотой) и линкером. Примесей, которые могут появиться в процессе синтеза, гораздо больше, чем у обычных пептидов. Отсутствующие пептиды, окислительные примеси, продукты выделения жирных кислот, димеры, примеси, связанные с линкером-, - все они должны подвергаться контролю и быть чистыми.

 

Нами накоплен большой опыт синтеза сложных пептидных примесей. Мы специализируемся на изучении тилпептида и знаем, каковы трудности с его профилем примесей и каковы основные элементы контроля. Мы можем настроить синтез различных средств контроля примесей тилпептидов в соответствии с вашими потребностями, используя данные подтверждения структуры, и помочь вам разработать метод так, чтобы вам было меньше шансов получить добавку при подаче заявки.

Молекулярная структура тильпептида определяет, что его профиль примесей намного сложнее, чем у обычных пептидов. Когда мы проводим исследования примесей, мы в основном сосредотачиваемся на следующих категориях:

Отсутствует пептид
39 аминокислот, любая из которых пропущена в процессе синтеза, являются примесью. Времена удерживания недостающих пептидов при ВЭЖХ были широко распределены, с различной полярностью недостающих пептидов в разных положениях. Некоторые отсутствуют на N-конце, некоторые посередине и некоторые рядом с местом прикрепления жирных кислот. Мы получили заказ от клиента на 15 недостающих пептидов в разных позициях для локализации всех возможных недостающих примесей в их процессе.

Окисляющие примеси
Встречающийся в последовательности тилпептид подвержен окислению до сульфоксида, а затем и до сульфона. Окисленные примеси часто появляются при исследованиях стабильности и со временем растут. Мы проводили сравнение, в ускоренных условиях за месяц пик окисления может вырасти до более чем 0,3%, без контроля.

Продукты, выделяющие жирные кислоты
Это примесь, уникальная для тильпептида. Его боковая цепь жирной кислоты (эйкозандиовая кислота) присоединена к лизину через линкер, и эта модификация может быть частично потеряна во время синтеза или хранения, в результате чего жирная кислота-удаляет примеси. Более проблематично то, что выделение может происходить в разных местах - между жирной кислотой и линкером или между линкером и пептидом -, что приводит к образованию различных примесей. Для наших клиентов мы синтезировали несколько примесей, связанных с жирными кислотами-, начиная от полного выделения и заканчивая небольшими фрагментами.

Димеры/полимеры
Две или более молекулы тильпептида группируются вместе, образуя димер или более. Молекулярная масса димера в два раза больше, чем у основного пика, и при ВЭЖХ он часто представляет собой широкий пик, поэтому его необходимо специально отделить и очистить, прежде чем его можно будет использовать в качестве контроля. Мы подготовили димеры, и потребовалось несколько циклов очистки, чтобы достичь чистоты более 95%.

Примеси, связанные с линкером-
Модификация тильпептида жирными кислотами использует линкер (например, -Glu, PEG и т. д.), и этот линкер сам по себе может вызывать побочные реакции во время синтеза, создавая примеси с отсутствующими или неполными линкерами. Такого рода примеси не встречаются в обычных пептидах, но присущи только тильпептидам, которые требуют специального изучения.

Дезаминированные примеси
Аспарагин (Asn) и глютамин (Gln) легко деамидируются в кислых условиях или при нагревании, образуя изомеры. В последовательности тилпептида присутствует несколько Asn и Gln, а примесь дезамидирования часто появляется в тесте на принудительное разложение, поэтому для обнаружения примеси необходимо использовать контрольный продукт.

Диастереоизомеры
Во время синтеза длинной цепи отдельные аминокислоты могут подвергаться рацемизации с образованием диастереоизомеров. Содержание такого рода примесей обычно невелико, но при декларировании эксперты спросят, и для подтверждения лучше иметь контрольный продукт.

Многие из этих примесей невозможно приобрести, и их необходимо синтезировать по индивидуальному заказу. Мы выполнили множество проектов по персонализации тильпептидных примесей, охватывающих все вышеперечисленные категории.

Удаление пептидного ряда
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, с подтверждением МС и ЯМР. Мы синтезировали набор пептидов с интервалом в 5 аминокислот от N-конца до C-конца.

Окисляющие примеси
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 %, и мы можем предоставить спектр ЖХ-МС для подтверждения степени окисления. Сульфоксид и сульфон разделяются с помощью ВЭЖХ, и мы можем сделать и то, и другое.

Продукты, выделяющие жирные кислоты
Это одна из самых сложных примесей в тилпептиде. Цепь жирной кислоты может быть полностью или частично нарушена (например, отсутствуют последние несколько атомов углерода). Мы можем синтезировать серию вариантов для разных положений цепи. В одном из самых сложных проектов, которые мы реализовывали, заказчик попросил нас синтезировать примесь с отсутствующими в цепочке жирных кислот 8 атомами углерода, и нам потребовалось два месяца, чтобы сделать это правильно.

Димер
Димеры, образованные в результате перекрестных-сшивок или не-ковалентных взаимодействий, могут быть получены различными методами, выделены и очищены для обеспечения контроля высокой чистоты. Димеры сложно очищать, но у нас есть опыт, позволяющий разделить мономеры.

Примеси, связанные с линкером-
Линкер (-Glu, PEG и т. д.) может отсутствовать или быть неполным, что приводит к появлению ряда сопутствующих примесей. Мы можем синтезировать различные варианты с отсутствующими линкерами, укороченными линкерами или несовпадающими линкерами и помочь вам построить спектры таких примесей.

Дезаминированные примеси
Для сайтов Asn и Gln в последовательности мы можем подготовить дезамидированные контрольные примеси путем принудительной деградации или целевого синтеза. Разница в молекулярной массе после дезамидирования составляет всего 1, что нелегко отличить с помощью МС, поэтому для подтверждения мы обычно используем ЯМР или специальные хроматографические условия.

Другие индивидуальные примеси
Если в ходе ваших исследований вы обнаружите новую неизвестную примесь, мы можем помочь вам проанализировать структуру и синтезировать ее. Отправьте нам образцы, мы проведем анализ ЖХ-МС, определим структуру, затем направленный синтез, а затем сравним время удерживания и масс-спектр, чтобы подтвердить согласие. Мы проделывали этот процесс много раз, и процент успеха довольно высок.

Разработка и валидация аналитического метода
При настройке метода ВЭЖХ или ЖХ-МС необходим контроль примесей для локализации, определения разделения, проверки линейного диапазона и извлечения. Без контроля в проверке метода отсутствует часть. Многие клиенты просят нас сначала внести несколько ключевых примесей, чтобы настроить метод, а затем постепенно доработать все остальное.

Гетерогенная масс-спектрометрия
При декларировании дженерика требуется комплексный качественный и количественный анализ технологических примесей и продуктов деградации. Местоположение, содержание и структура каждой примеси должны быть подтверждены контрольным продуктом. Мы видели, что декларация с информацией была отправлена ​​​​для заполнения, в девяти случаях из десяти примеси этой части не понимались.

Исследования стабильности
В ходе долгосрочного-тестирования стабильности и ускоренного тестирования необходимо определить, какие продукты деградации являются доминирующими и каковы тенденции в контенте. Благодаря контролю примесей мы можем точно измерять и отслеживать их количество. Клиент проверял стабильность препарата тилпептида и обнаружил, что пик разложения растет очень быстро в ускоренных условиях, поэтому мы проанализировали и синтезировали его с помощью МС, чтобы подтвердить структуру, а затем клиент с облегчением сообщил об этом.

Тестирование пакетного выпуска
После коммерциализации каждая партия АФИ или состава должна быть проверена на наличие рассматриваемого вещества. Контроль примесей является важным инструментом для тестирования выпуска.

Информация о декларациях на непатентованные лекарственные средства
Исследования примесей являются ключевым разделом регистрационной информации. Предоставление полного профиля примесей и данных контроля значительно снижает риск публикации обзора.

Пример 1: фармацевтическая компания, программа создания генерических препаратов тилпептида.
Они разрабатывают непатентованную версию тильпептида, и для валидации метода им необходим полный набор средств контроля примесей. Мы настроили для них 12 примесей: 5 недостающих пептидов, 2 окисленные примеси, 1 димер, 2 продукта выделения жирных кислот и 2 примеси, связанные с линкером. Каждый из них имеет чистоту более 95% и сопровождается данными МС и ЯМР. Руководитель проекта сказал: «Примесей в тилпептиде в два раза больше, чем в других пептидах, но вы можете сделать их все, и данные будут полными, что экономит нам много работы». Позже валидация их метода была успешно завершена, и теперь они готовятся к декларации.

Случай 2: Компания CRO, составление профиля примесей
Они предприняли проект качественного исследования тилпептида, который потребовал всестороннего анализа технологических примесей. Они прислали нам образцы неочищенного пептида, и мы провели анализ ЖХ-МС, определили возможные структуры нескольких неизвестных примесей, затем целенаправленно синтезировали их, сравнили время удерживания и масс-спектры и подтвердили четыре новых примеси -, две из них были связаны с линкером-, а две из них представляли собой варианты отщепления жирных кислот. Клиент использовал эти данные для уточнения профилей примесей и успешно прошел приемку клиента.

Случай 3: Исследования стабильности, биотехнологическая компания
Они исследовали стабильность состава тилпептида и обнаружили, что количество продукта разложения быстро увеличивается в ускоренных условиях, но они не знали, что это такое. Мы проанализировали образец методом ЖХ-МС и предположили, что это примесь дезамидирования в определенном сайте Asn, а затем целенаправленно синтезировали ее и подтвердили это путем сравнения. Они провели анализ с использованием этого контроля и точно отслеживали тенденцию разложения продукта. Позже, когда они представили отчет, эта часть данных была подчеркнута экспертами, а из-за достоверности данных компенсация не была назначена.

Тилпептид – популярный продукт, но исследование примесей – деликатная работа, особенно продуктов отшелушивания жирных кислот и примесей, связанных с линкером-, с которыми многие производители не могут справиться. Если вы проводите качественные исследования или разрабатываете непатентованный тилпептид и вам необходим контроль примесей, свяжитесь с нами. Мы проделали большую работу, знаем, какие есть трудности, и знаем, как их преодолеть.